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细胞培养瓶中出现了污染的原因排查
发表日期:2022-08-08

我们在发现细胞培养瓶中出现了污染的原因排查一般都是采用单一变量法,先把每种试剂:基础培养基、FBS、PBS、完全培养基、不加双抗的完全培养基和冻存液吸取少量到6孔板,放在培养箱过夜/2天(因为4℃冰箱温度低不利于细菌的生长,拿来涂片不易找得到。如果肉眼和显微镜看不到细菌污染也不能排除污染,因为细菌会依附在细胞上,空培没有细胞,细菌又很小很难看到,所以最长可放置7天,若7天后还没有污染迹象就可以排除!)。

细胞培养瓶中出现了污染的原因排查_富道细胞

之后进行离心:12000rpm、1min,弃去上清留下少许液体重悬沉淀后涂片、风干后滴加结晶紫染液1min后用少量慢速清水在上面冲洗3次(不要对着涂片的位置冲!),在吸水纸3个不同位置各压干一次后滴一滴香柏油到载玻片后在油镜下观察有无细菌。镜下形态规则、两头染色深中间染色浅的长杆状是杆菌;形态是正圆光滑的球状、整个球形染色深的是球菌(大小都不是很大的),其它形态不规则、过大/过小、一大片的可能只是杂质和细胞膜碎片等等。此方法即为革兰氏染色法,是最常用的细菌染色法,结晶紫也可称之为龙胆紫,是碱性染料。当它溶解后,可以被活细胞摄入,同时可以使DNA、蛋白质、脂肪着色。染色显示细胞核(与核酸结合)呈蓝色,细胞质呈粉红色。肉眼显示整个细胞呈深蓝色。

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