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细胞工厂内支原体污染的四种检测方法
发表日期:2021-12-13

在利用细胞工厂培养细胞时,支原体污染是非常普遍的问题。不同于其他污染,支原体污染细胞后培养基一般不发生浑浊,所以我们很难通过肉眼判断。判断细胞是否受到支原体污染,可以通过以下四种方法:

细胞工厂内支原体污染的四种检测方法
10层细胞工厂培养基


1、DNA荧光染色法
DNA荧光染色法是利用荧光染色剂双苯咪唑Hoechst33258能够结合支原体DNA中的A-T碱基富集区域的原理,被支原体污染的细胞经染色后,其细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一的荧光点,即是富含A-T碱基区域的支原体DNA。
2、PCR技术
根据支原体基因组内的保守序列设计特异引物,对待检样品的核酸进行扩增,通过对扩增产物的大小分析作出诊断。PCR检测技术用于支原体污染的检测,周期短、灵敏度高、特异性好、操作简单且一次可检测大量样品。

细胞工厂内支原体污染的四种检测方法
高效摇瓶5L

3、酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISA用于支原体污染的检测中,有着良好的特异性和敏感性,一次可以完成大量样品的检测。具有简便、快速与定量定性检测等特点。
4、电镜
一般细胞工厂中的细胞培养48~72小时,细胞接近汇合前,用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。


40层细胞工厂


以上是检测细胞工厂内支原体污染时,常用的四种检测方式。目前已知能污染细胞的支原体有20种以上,其中95%以上都是口腔支原体,所以操作人员在进行细胞培养时要注意无菌操作。

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