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冻存管复苏细胞的流程
发表日期:2022-12-26

我们在细胞培养的过程中,为了减少细胞代谢从而达到长期储存的目的,就会利用冻存管进行细胞冻存,那么我们在后续使用到细胞的时候就需要进行细胞复苏了,今天富道细胞就跟大家简单分享一下冻存管复苏细胞的流程,其中分为玻璃化冻存和非玻璃化冻存的两种复苏方式:

一、非玻璃化冻存的复苏方法

1.调配370C~400C的温水,或将恒温水浴箱的温度调节至370C~400C;

2.从液氮中取出冻存管,立即投入370C~400C温水中迅速晃动,直至冻存液完全溶解;

3.将细胞冻存悬液转移到离心管内,加入约5ml培养液,轻轻吹打混匀;

4.将细胞悬液经800~1000r/min离心5min,弃上清夜;

5.向细胞沉淀内加入完全培养液,轻轻吹打混匀,将细胞悬液转移到培养瓶内,补足培养液进行培养。

冻存管复苏细胞的流程_富道细胞

二、玻璃化冻存的复苏方法

1.将冻存管从液氮中取出,立即投入冰浴中5min。复温速率约5600C/min。一次可以进行多个冻存管的复苏;

2.将冻存管两端剪断,可以将5ml细胞冻存悬液转移到50ml离心管中;

3.沿离心管壁缓慢加入已在冰浴中预冷的含20%胎牛血清的Hanks平衡盐溶液。前10min以0.2ml/min的速度加入,后10min以0.5ml/min的速度加入,接着的15min以0.75ml/min的速度加入,最后30min以1ml/min的速度加入。全过程约为65min,都在冰浴中进行;

4.将稀释后的细胞悬液以400r/min离心5min,去除上清。向细胞沉淀中加入培养液重新悬浮细胞,用于培养。

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