我们在细胞培养的过程中，为了减少细胞代谢从而达到长期储存的目的，就会利用冻存管进行细胞冻存，那么我们在后续使用到细胞的时候就需要进行细胞复苏了，今天富道细胞就跟大家简单分享一下冻存管复苏细胞的流程，其中分为玻璃化冻存和非玻璃化冻存的两种复苏方式：

一、非玻璃化冻存的复苏方法

1.调配370C～400C的温水，或将恒温水浴箱的温度调节至370C～400C；

2.从液氮中取出冻存管，立即投入370C～400C温水中迅速晃动，直至冻存液完全溶解；

3.将细胞冻存悬液转移到离心管内，加入约5ml培养液，轻轻吹打混匀；

4.将细胞悬液经800～1000r/min离心5min，弃上清夜；

5.向细胞沉淀内加入完全培养液，轻轻吹打混匀，将细胞悬液转移到培养瓶内，补足培养液进行培养。

二、玻璃化冻存的复苏方法

1.将冻存管从液氮中取出，立即投入冰浴中5min。复温速率约5600C/min。一次可以进行多个冻存管的复苏；

2.将冻存管两端剪断，可以将5ml细胞冻存悬液转移到50ml离心管中；

3.沿离心管壁缓慢加入已在冰浴中预冷的含20％胎牛血清的Hanks平衡盐溶液。前10min以0.2ml/min的速度加入，后10min以0.5ml/min的速度加入，接着的15min以0.75ml/min的速度加入，最后30min以1ml/min的速度加入。全过程约为65min，都在冰浴中进行；

4.将稀释后的细胞悬液以400r/min离心5min，去除上清。向细胞沉淀中加入培养液重新悬浮细胞，用于培养。