细胞冻存为了减少我们在细胞培养时的细胞代谢频率，从而进行长期储存的一种细胞培养技术，是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。那么，细胞冻存的需要用到哪些细胞培养耗材，其冻存步骤又是怎样的呢？利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。细胞冻存需要用到的细胞培养耗材包括冻存管、细胞培养瓶、吸管、移液管等。冻存步骤如下：

1. 待冻存细胞悬液的制备

（1）按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物，制备单细胞悬液，并计算细胞总数；

（2）将细胞悬液以800～1000r/min离心5min，去上清夜；

（3）向细胞沉淀物中加入冷冻保护液，轻轻吹打混匀，使细胞密度达1×106～1×107个/ml；

（4）按每管1～1.5ml的量分装于冻存管内，拧紧管盖；

（5）最后将冻存管上做好标记，包括细胞代号及冻存日期。

2. 分级冷冻

（1）首先将冻存管放入普通冰箱冷藏室（4～80C），放置时间在半小时到一小时左右；

（2）后续将冻存管置于普通冰箱冷冻室（-100C～-200C），此次时间在半小时到一个小时左右；

（3）之后将冻存管转入低温冰箱（-300C），冻存时间维持在半小时左右；

（4）然后将冻存管转移到超低温冰箱（-700C～-800C），放置一夜；

（5）最后将冻存管投入液氮保存。

3. 记录

做好冻存记录。记录内容包括冻存日期、细胞代号、冻存管数、冻存过程中降温的情况、冻存位置以及操作人员，此时可以选用富道细胞的SBS三码合一冻存管，记录更加简单。