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使用冻存管进行细胞冻存
发表日期:2022-12-23

细胞冻存为了减少我们在细胞培养时的细胞代谢频率,从而进行长期储存的一种细胞培养技术,是细胞保存的主要方法之一,起到了细胞保种的作用。那么,细胞冻存的需要用到哪些细胞培养耗材,其冻存步骤又是怎样的呢?利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。细胞冻存需要用到的细胞培养耗材包括冻存管、细胞培养瓶、吸管、移液管等。冻存步骤如下:

使用冻存管进行细胞冻存_富道细胞

1. 待冻存细胞悬液的制备

1)按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物,制备单细胞悬液,并计算细胞总数;

2)将细胞悬液以8001000r/min离心5min,去上清夜;

3)向细胞沉淀物中加入冷冻保护液,轻轻吹打混匀,使细胞密度达1×1061×107/ml

4)按每管11.5ml的量分装于冻存管内,拧紧管盖;

5)最后将冻存管上做好标记,包括细胞代号及冻存日期。

2. 分级冷冻

1)首先将冻存管放入普通冰箱冷藏室(480C),放置时间在半小时到一小时左右;

2)后续将冻存管置于普通冰箱冷冻室(-100C-200C),此次时间在半小时到一个小时左右;

3)之后将冻存管转入低温冰箱(-300C),冻存时间维持在半小时左右;

4)然后将冻存管转移到超低温冰箱(-700C-800C),放置一夜;

5)最后将冻存管投入液氮保存。

3. 记录

做好冻存记录。记录内容包括冻存日期、细胞代号、冻存管数、冻存过程中降温的情况、冻存位置以及操作人员,此时可以选用富道细胞的SBS三码合一冻存管,记录更加简单。

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