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细胞培养瓶在细胞传代中的应用
发表日期:2021-06-03

细胞培养瓶根据形状的不同有直颈、斜颈、角度颈、三角形、矩形等种类,规格包括25ml、75ml、175ml、250ml,其中小规格的多用于细胞传代、保存细胞、为实验提供细胞等用途。

细胞培养瓶

T225细胞培养瓶

细胞在细胞培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。具体操作步骤如下:

10层细胞工厂

10层细胞工厂

  1. 将长满细胞的细胞培养瓶中原来的培养液弃去。
  2. 加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
  3. 瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。
  4. 用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。


悬浮细胞培养摇瓶

以上是细胞培养瓶在细胞传代中的应用,消化液的配制方法如下:称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1:250),加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,滤器过滤除菌,4℃保存,用前可在37℃下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA,使最终浓度达0.02%。

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