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细胞培养瓶之人间充质干细胞的传代
发表日期:2022-09-08

1.将PBS,胰酶置于37°C水浴锅中预热;

2.超净台中,吸去培养瓶中的培养液;

3.轻轻加入5mLPBS于细胞培养瓶中,轻轻晃动洗涤细胞后吸去PBS,共洗涤两次;

4.加入2mL浓度为0.05%的胰酶,轻轻晃动,使胰酶溶液均匀覆盖培养瓶底面。显微镜下,当70-80%的细胞变圆时轻拍培养瓶,并立即加入10mL人间充质干细胞无血清完全培养基进行中和。轻轻吸取瓶内液体反复冲洗瓶底,使细胞完全脱落;

细胞培养瓶之人间充质干细胞的传代_富道细胞

注意:

1)吹打时动作要轻,避免损伤细胞;

2)建议使用浓度为0.05%的胰酶,并且消化时间不宜过长,以减少胰酶对干细胞的损伤。

5.将细胞悬液转移到15mL离心管中,300g离心10min;

6.小心去除上清,而后加入10mLPBS重悬细胞沉淀,并再次300g离心10min;

7.小心去除上清,加入2-3mL人间充质干细胞无血清完全培养基重悬细胞沉淀,按1:2或1:3的比例接种到新的细胞培养瓶中,再次加入足量的完全培养基,轻轻晃动培养瓶,使细胞分布均匀;

8.将细胞置于37°C,5% CO2的细胞培养箱中培养。

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