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细胞培养瓶复苏人间充质干细胞
发表日期:2022-09-08

1.准备好37°C水浴;

2.超净台中,取5mL人间充质干细胞无血清完全培养基于细胞培养瓶中(可根据实际复苏的细胞量选择培养容器与培养基体积),并将培养瓶置于37°C,5% CO2培养箱中孵育30min;

3.超净台中,取10mL人间充质干细胞完全培养基于15mL离心管中,待用;

注意:无需将人间充质干细胞无血清完全培养基预先水浴至37°C,以免影响培养基中生长因子的活性。

4.从液氮中取出冻存的人间充质干细胞,迅速将冻存管置于37°C温水中,并快速晃动冻存管,使其内含物尽快融化,待冻存管内含物融化完全后取出;

注意:

1)尽可能将冻存管的内含物全部浸没于37°C温水中,使内含物均匀融化;

2)    请勿使温水没过冻存管盖的螺口以防污染;

3)    细胞复苏的操作过程要迅速,避免影响细胞复苏后的活性。

细胞培养瓶复苏人间充质干细胞_富道细胞

5.在将冻存管拿进超净台之前,用75%酒精对其表面进行消毒;

6.轻轻重悬细胞,并将其移入待用的装有10mL人间充质干细胞完全培养基的15mL离心管里;

7.用1mL培养基再次冲洗冻存管,并将此悬液移至离心管中,轻轻吹打混匀;

8.室温下,300g离心10min;

9.倾去上清,往沉淀加入2-3mL的人间充质干细胞完全培养基,轻轻吸打均匀;

10.从细胞培养箱中取出已预先孵育30min的细胞培养瓶,吸去培养瓶中的液体;

11.将细胞按0.8-1.0×104个活细胞/cm2的密度接种到细胞培养瓶中,并加入足量的人间充质干细胞无血清完全培养基,轻轻摇晃培养瓶,使细胞分布均匀;

12.将细胞置于37°C,5% CO2的细胞培养箱中培养;

13.第二天,更换新鲜的人间充质干细胞无血清完全培养基;

14.每隔两天更换一次新鲜的培养基,直至细胞生长至80-90%的汇合度。

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