细胞培养瓶是一种方形的细胞培养容器,一般用于贴壁细胞的培养。在培养细胞时我们需要掌握细胞的状态,以确定细胞培养的效果如何,细胞活力是一项重要指标。
在细胞培养瓶培养细胞时,群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力。通常我们会通过以下几种方法进行检测:
1、染色排除法,也是比较常用的方法。
(1)台盼蓝法:死细胞染成蓝色,活细胞不着色;
(2)苯胺黑法:死细胞染成黑色,活细胞不着色;
(3)伊红Y法:光学显微镜下细胞核呈蓝黑色,胞浆呈淡红色。凋亡细胞在组织中单个散在分布,核染色质致密浓缩,核固缩,核破碎,形成凋亡小体等。
2、荧光排除法:生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光;生活力弱的细胞发出荧光也较弱;死亡细胞无荧光。
3、细胞内酶与特定试剂的显色反应:
(1)MTT比色实验:琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围,其量与细胞数呈正比,也与细胞活力呈正比
(2)克隆形成试验:测定单个细胞增殖能力的有效方法。克隆形成率 =(克隆数/接种细胞数)×100%
判断细胞培养瓶内的细胞状态,可以通过细胞活力的检测来辨别,具体选择哪种方法,根据实际需要而定。
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