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怎样将冻存细胞转移至细胞培养瓶内
发表日期:2021-09-14

细胞冻存是将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术。除了保护细胞外,常利用这种技术来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。那么,我们怎样将冻存的细胞转移到细胞培养瓶内呢?

细胞冻存

冻存的细胞需要复苏后才能进行下一步的操作,复苏细胞时速到要快,这样可以很好的保存细胞的活力,在操作时可按如下步骤进行:

1. 收到细胞后,检查外包装是否完整;打开外包装,取出保存于干冰中的细胞;

2. 检查冻存管是否有破损,内容物是否融化,将取出的冻存管迅速放入37℃水浴锅中融化;

3. 冻存管用75%酒精消毒,放入生物安全柜中;

4. 将5ml完全培养基加入15ml离心管中备用;

5 将冻存管中的细胞悬液加入到准备好的培养基中,轻轻混匀;

6. 将15mL离心管放入离心机中离心,1000rpm/min(约200g)离心3-5min;

7. 将5ml完全培养基加入到25ml细胞培养瓶中备用;

T175细胞培养瓶
T175细胞培养瓶


8. 取出离心好的细胞,酒精消毒后放入安全柜中;

9. 轻轻吸去离心好的细胞上清,加入1ml完全培养基重悬细胞;

10. 将重悬好的细胞加入到准备的细胞培养瓶中,轻轻混匀;

11. 在显微镜下观察接种的细胞状态及密度,将培养瓶放入37℃培养箱中培养。

细胞工厂
细胞工厂

在细胞复苏过程中,快速融合可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。所用到的细胞培养瓶及其他耗材,应确保无菌。

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