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如何对细胞培养瓶内的细胞进行传代
发表日期:2021-08-31


传代培养是指需要将分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。细胞培养瓶是培养细胞时常用的耗材,那么,如何对瓶内的细胞进行传代操作呢?

细胞培养瓶

T225细胞培养瓶

一般在细胞培养瓶内的细胞长成致密单层后基本饱和,为了使细胞能够继续生殖,同时扩大细胞数量,就需要进行传代操作。悬浮细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需要经过消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化贴壁细胞成单个细胞,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力。观察细胞直到细胞变圆脱离瓶壁,此过程往往需要5-15分钟,为了避免细胞成团,消化细胞的过程中不要拍打细胞培养瓶。

悬浮细胞培养摇瓶

悬浮细胞培养摇瓶

对于特别难消化的细胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞置于37°C 促进消化,细胞脱离瓶壁后,立刻加入含有血清的完全培养基中止消化,血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。一般情况下,离心并不是必需的。如果细胞需要无血清或者低血清的培养基,可以以125000g 转速离心5分钟,然后弃去中止用的培养基,加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞再传代。

细胞工厂

细胞工厂

细胞传代的比例一般是1:2-1:20,具体要视细胞的类型而定。在传代过程中,胰蛋白酶会对一些细胞的细胞膜产生损伤,可以用细胞刮轻轻刮下细胞,加入适量的培养基,轻轻吹打混匀细胞,移入到新的培养瓶。

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