传代培养是指需要将分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。细胞培养瓶是培养细胞时常用的耗材，那么，如何对瓶内的细胞进行传代操作呢？
T225细胞培养瓶
一般在细胞培养瓶内的细胞长成致密单层后基本饱和，为了使细胞能够继续生殖，同时扩大细胞数量，就需要进行传代操作。悬浮细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需要经过消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化贴壁细胞成单个细胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力。观察细胞直到细胞变圆脱离瓶壁，此过程往往需要5-15分钟，为了避免细胞成团，消化细胞的过程中不要拍打细胞培养瓶。
悬浮细胞培养摇瓶
对于特别难消化的细胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞置于37°C 促进消化，细胞脱离瓶壁后，立刻加入含有血清的完全培养基中止消化，血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。一般情况下，离心并不是必需的。如果细胞需要无血清或者低血清的培养基，可以以125000g 转速离心5分钟，然后弃去中止用的培养基，加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞再传代。
细胞传代的比例一般是1:2-1:20，具体要视细胞的类型而定。在传代过程中，胰蛋白酶会对一些细胞的细胞膜产生损伤，可以用细胞刮轻轻刮下细胞，加入适量的培养基，轻轻吹打混匀细胞，移入到新的培养瓶。
