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细胞培养板在细胞克隆形成实验中的应用
发表日期:2021-08-31


细胞培养板是一种多孔结构的细胞培养耗材,主要应用于小规模的细胞培养实验或细胞的前期培养,也可以用于细胞克隆形成实验。

细胞培养板

细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的一种重要途径,一般使用的耗材为6孔的细胞培养板。实验可按照以下流程进行操作:

1、将处于对数生长期的细胞胰酶消化后,完全培养基(基础培养基+10%胎牛血清)重悬成细胞悬液,并计数;

2、细胞接种:于6孔细胞培养板中各实验组接种400-1,000个细胞/孔(根据细胞生长情况确定,一般为700个细胞/孔);

3、继续培养到14天或绝大多数单个克隆中细胞数大于50为止,中途每隔3天进行换液并观察细胞状态;

4、克隆完成后,在显微镜下对细胞进行拍照,然后PBS洗涤1次,每孔加入1 mL 4%多聚甲醛固定30-60 min,PBS洗涤1次;

细胞培养板

T225细胞培养瓶

5、每孔加入结晶紫染液1ml,染细胞10-20 min;

6、PBS 洗涤细胞数次,晾干,数码相机拍照(分别对整个六孔板及每个孔进行单独拍照),进行计数。

96孔酶标板

96孔酶标板

以上是细胞培养板在细胞克隆形成实验中的应用,在操作换液时需要缓慢加入培养基,防止吹起细胞,染色完成后务必将染液清洗干净,避免影响实验结果。

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