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如何将细胞培养瓶内的细胞进行传代
发表日期:2023-01-13

细胞培养瓶是贴壁细胞培养时常用的工具,在培养细胞时涉及到细胞的传代操作。我们该如何将贴壁细胞进行传代呢?可以按以下步骤操作:

1.取出预热好的培养用液:取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

2. 从培养箱内取出细胞:注意细胞培养瓶取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。

3. 将培养瓶放入超净工作台后打开瓶口,同时要在酒精灯上烧口消毒。

如何将细胞培养瓶内的细胞进行传代_富道细胞

4. 加入消化液:小心吸出旧培养液,用 PBS 清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞较好好,消化温度是 37℃。

5. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。

6. 弃去胰蛋白酶液,加入新鲜的培养液终止反应。小心吹打成细胞悬液。

7. 将细胞悬液吸入 10 ml 离心管中。平衡后将离心管放入离心机中,以 1000 rpm/min 离心 5 min。

8. 弃去上清液,加入适当体积的培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

9. 将细胞悬液吸出分装至 2 - 3 个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。

10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于 5×105 /ml。最后要做好标记。

11. 继续培养:用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入 CO2 培养箱中继续培养。传代细胞 2 - 4 h 后开始贴附在瓶壁上。

细胞培养瓶内的细胞传代涉及到细胞的消化,我们要注意控制好消化时间,避免因为消化过度,对细胞造成损伤。

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