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使用细胞培养瓶进行细胞培养的基本流程
发表日期:2023-01-05

细胞培养是一项非常艰巨的任务,在操作中任何一点小细节上的疏忽都有可能导致实验功亏一篑。细胞培养瓶是使用频率比较高的一种培养容器,那么基本流程是什么样的呢?

首先要注意无菌。无论哪一管液体,开盖后尽量立即关上,盖子向上放。操作时不要从开盖的容器上方经过。另外,无菌台面上摆放的各种东西,最好是一字摆开,平行于自己。尽量不要前后重叠。

细胞操作中所用的所有耗材试剂最好都是细胞培养专用。一般都以一次性耗材居多。

(1)细胞换液:培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液,加入新培养液。

(2)细胞传代:传代之前先观察,细胞是否密集,是否开始融合。一般融合达到70-80%就可以传代。早点传代也可以。

使用细胞培养瓶进行细胞培养的基本流程_富道细胞

如果是贴壁生长的细胞:

1) 培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液;

2) 无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次(按培养体积加入);

3) 加入适量胰酶消化适当时间(一般胰酶为0.25%;9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑,一般如果是细胞株,非原代培养,消化1-2分钟足矣);

4) 用枪头吹打数十次(视细胞类型而定。一般细胞株30-50次吧,耗时一般2分钟左右);

5) 加入适量体积完全培养基终止胰酶消化(如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,可以加入1mL完全培养基;现在培养瓶(皿)里有2mL溶液)。

6) 现在可以将溶液进行分瓶(2mL)。如果是细胞株,直接均分到两个培养瓶(皿)里。如果是原代培养,可以根据消化时间来对细胞进行分离;因此可以将溶液(2mL)都转入新的培养瓶(皿)。

7) 将两个培养瓶(皿)补足完全培养基到正常体积(果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,为5mL完全培养液)

8) 镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁,悬浮在溶液中,呈圆形。一般2h之内会贴壁,如果已经贴壁,根据细胞类型有不同的形态,但通常都不是圆形。

9) 镜下观察无误之后,再放入细胞培养箱。培养瓶(皿)放入之前,可以用消毒酒精先擦一下。

10) 传代之后,最好第二天细胞换液一次。当然,也可以视情况而定。

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