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细胞培养瓶培养时细胞污染了怎么补救
发表日期:2022-08-04

我们立即弃去细胞培养瓶中的培养基,以PBS润洗2~3次,加入胰酶处理至细胞形态略有改变但未脱离容器时弃去胰酶,加入PBS轻轻润洗1遍; 

在细胞培养瓶中加入20×双抗,浸泡细胞3~5min,弃去双抗,并加入新鲜的完全培养基(含10×双抗)培养12h;

12h弃去培养基以PBS润洗2~3遍后加入完全培养基(含10×双抗),传代时以较小转速离心(如平时以1000r/min离心,则可降为800~900r/min离心),仍以含10×双抗的培养基培养。

细胞培养瓶培养时细胞污染了怎么补救_富道细胞

若第二代后镜下找不到细菌,则第三代起可正常培养。正常培养48h后无反弹则可认为污染已清除。

若为霉菌污染,在以PBS润洗2~3遍后换液,无需加入高浓度双抗。培养48h后污染未再次出现即可。

若为真菌污染,在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B(两性霉素B有细胞毒性,不推荐使用),也可加入300μg/mL氟康唑培养,污染控制后改用150μg/mL培养2~3代。

若怀疑支原体污染,则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂(如:某恒生物)。也可购买环丙沙星注射液,于超净台内打开直接添加到培养基中,以20μg/mL浓度2代后改用10μg/mL浓度持续培养约2周。

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