细胞培养瓶是一种方形的细胞培养耗材,主要用于各种贴壁细胞的培养。贴壁细胞需要附着在支持物表面才能生长,由于其自身特性,在消化这类细胞的时候一般要借助蛋白水解酶。常用的两种蛋白水解酶有两种,分别是:胰蛋白酶和胶原酶。
1.胰蛋白酶(Trypsin)
胰蛋白酶是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断,不仅起消化酶的作用,而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体,起活化作用。
胰蛋白酶能直接作用在细胞培养瓶内细胞外的黏附蛋白及胞外基质上,但如果作用时间过长,细胞膜上內嵌的其他蛋白也会被水解,导致细胞膜受损;不同细胞适合的胰蛋白酶使用浓度及作用时间都各有不同。
2.胶原酶(Collagenase)
为一种胶原水解酶,大多由细菌提取而来;能辨识并剪切Pro-X-Gly-Pro胜肽序列,而此序列在胞外基质主成分-胶原蛋白中出现的频率比一般蛋白高很多,使得胶原酶能较专一的作用在胞外基质上。
所以对细胞的伤害比胰蛋白酶小,且在钙、镁离子环境中仍有活性,可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培养液配制。操作简便,但胶原酶价格相较于胰蛋白酶要高出许多,如果大量使用将增加实验成本。
以上是细胞培养瓶培养贴壁细胞时经常用到的两种蛋白水解酶,两种酶各有特点,都可以用来消化细胞,但在使用时要根据各自的特点,控制好消化时间,避免消化过度,影响细胞后期生长。
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