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细胞培养瓶在细胞裂解实验中的应用
发表日期:2022-04-15


细胞裂解是改变细胞通透性和活性的重要实验方法,它是指细胞在被病毒侵染后,病毒利用宿主细胞中的营养物质合成自己的后代,然后病毒后代使宿主细胞破坏,从而被释放出细胞。


在细胞裂解实验中,细胞培养瓶是一种常用耗材。细胞裂解的步骤如下:


1.倒掉培养液,并将细胞培养瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走)。


2.每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放轻轻摇动1min洗涤细胞,然后弃去洗液。重复以上操作两次,共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。


3.按1ml裂解液加10ul PMSF(100mM),摇匀置于冰上。(PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。)


细胞培养瓶在细胞裂解实验中的应用


4.每瓶细胞加400ul含PMSF的裂解液,于冰上裂解30min,为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。


5.裂解完后,用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧(动作要快),然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。(整个操作尽量在冰上进行。)


6.于4℃下12000rpm离心5min。(提前开离心机预冷)


7.将离心后的上清分装转移倒0.5min的离心管中放于-20℃保存。


细胞培养瓶不止应用于细胞裂解实验中,也用于实验室中等规模的细胞和组织培养,如Vero细胞,HEK 293细胞、CAR-T细胞、CHO细胞、昆虫细胞等。


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