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在细胞培养瓶内培养仓鼠肾细胞的具体步骤
发表日期:2022-03-07

在培养各种细胞时,细胞培养瓶是使用频率比较高的一种细胞培养耗材,它多用于贴壁细胞的培养,规格从25ml-225ml不等。仓鼠肾细胞培养液会选用这种耗材,其培养的具体步骤如下:

T75细胞培养瓶

T75细胞培养瓶

1、细胞培养前期准备工作:

1)准备MEM培养基;优质胎牛血清,10%;双抗1%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

T225细胞培养瓶

T225细胞培养瓶

2、细胞处理:

1)冻存细胞的复苏:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的细胞培养瓶中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

三角细胞摇瓶

三角细胞摇瓶

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

以上是在细胞培养瓶内培养仓鼠肾细胞的具体步骤。此外,细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml。
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