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细胞摇瓶在摇瓶种子制备中的应用
发表日期:2022-02-09

摇瓶种子是指将斜面种子或米孢子接种入装在细胞摇瓶(又称“三角摇瓶”)内的液体营养培养基中,在摇床上振荡培养得到的液体种子。摇瓶种子制备流程如下:

125ml三角细胞摇瓶

125ml三角细胞摇瓶

1、培养基配制

摇瓶种子以培养具有强生长活性的营养菌体为目的,因而在配制培养基时必须全面、均衡地满足菌体生长对各种营养物质的要求,包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。摇瓶种子在培养过程中不便于调节PH,因此在选择培养基时要考虑培养过程中PH的稳定,可以通过生理酸、碱性物质的平衡搭配及加入磷酸盐、碳酸钙之类缓冲剂来实现。

500ml三角细胞摇瓶

500ml三角细胞摇瓶

2、接种

摇瓶种子的接种一般采用斜面种子挖块法或米孢子粒计数接入法。这种接种方式难于掌握一致的接种量,可能会影响种子质量的稳定。对接种量敏感的菌种,尽量采用悬液接种法,即用无菌蒸馏水将斜面种子或米孢子粒上的细胞或孢子洗下,制成细胞或孢子悬液,然后按一定体积或一定细胞数接种至摇瓶种子培养基中。

2L细胞转瓶

2L细胞转瓶

3、培养

在恒温室内的摇床上进行培养,一般选用旋转式摇床,这样更利于培养时气体交换。为了使细胞摇瓶中的水分蒸发量保持稳定,恒温室也应控制好湿度。

以上是摇瓶种子的制备过程,细胞摇瓶是制备过程中的必备耗材。制备好的种子应当在培养成熟后立即使用。如果暂时不用,可以放在4℃冰箱中保存,保存期尽量不要超过3天。
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