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怎样对细胞培养瓶内的细胞进行传代
发表日期:2022-01-21

细胞培养瓶是细胞初级培养阶段经常会用到的一种耗材,它多用于贴壁细胞的培养。在细胞生长到一定程度后,就需要对瓶内的细胞进行传代,具体如何操作呢?

T75细胞培养瓶

T75细胞培养瓶

当原代细胞培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。所以,必须对细胞进行传代再培养。具体步骤如下:

1、去掉原来细胞培养瓶中的培养基,加入3-4 ml PBS洗1-2次;

PETG血清培养基瓶

PETG血清培养基瓶

2、加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2),37℃作用数分钟,于倒立显微镜下观察,当细胞将要分离而呈现圆粒状时,吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去trypsin-EDTA,则在trypsin-EDTA作用后,加入适量含血清之新鲜培养基终止trypsin作用,离心后再吸掉上清液。

T25细胞培养瓶

T25细胞培养瓶

3、轻拍拼字使细胞自瓶壁脱落,加入适量之新鲜培养基,以吸管上下吸放数次以打散细胞团块,混和均匀后,依稀释比例转移至新的瓶中,以正常培养条件培养。

以上是细胞培养瓶内的细胞传代操作步骤,在操作时注意无菌操作,控制好细胞接种密度,这也是确保细胞后期生长良好的基础条件。
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