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细胞工厂内细胞的活性检测——MTT法
发表日期:2022-01-10

细胞工厂是贴壁细胞培养经常会用到的一种细胞培养耗材,在实验过程中我们要实时掌握细胞的生长状态,根据具体情况做出相关调整。可以通过MTT法对细胞的活性进行检测,从而确定细胞生长情况。

10层细胞工厂

10层细胞工厂

MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

40层细胞工厂

40层细胞工厂

在检测细胞工厂内细胞的活性之前,非常重要的一个步骤便是配制MTT。通常,此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器尽量用铝箔纸包住。

细胞培养瓶

细胞培养瓶

在利用MTT法测定细胞工厂内的细胞活性时要注意,MTT有致癌性,用的时候小心。这种方法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度尽量在0-0.7 范围内。


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