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如何利用细胞培养板制备细胞爬片
发表日期:2021-10-11


细胞爬片是指让玻片浸在细胞培养基内,细胞在玻片上生长,在做免疫荧光、激光共聚焦、凋亡检测时,免不了要制备细胞爬片。制备时需要一些耗材,其中细胞培养板是一种必备耗材。具体的制备步骤如下:

96孔细胞培养板
96孔细胞培养板

1、爬片准备

1)爬片可用一般的盖玻片,也可用专用细胞爬片。可根据自己的需要,到染色时再将之切开,这样既保证了细胞均一性,又可同时做几个指标的染色剪裁成合适大小,置于6孔细胞培养板、12孔板或24孔板;

2)将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡并过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三蒸水冲洗3遍,放在玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。

3)高压后取出放入烤箱中烤干,放入超净台中备用。

2、细胞爬片

1)胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。

血清培养基瓶
血清培养基瓶

2)加细胞时,根据玻片的大小,先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基,目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起,然后放玻片,防止加细胞悬液时玻片漂起,造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。

3)根据自己的需要选择合适的细胞密度种入细胞培养板内即可。

4)待细胞贴壁后,可去上清加含药培养基。

5)按照实验设计,作用一定时间后取玻片。如果要做诸如24h,48h,72h等这样时间点的实验的话,将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。末取出的可接着继续培养。

3、细胞爬片固定

细胞爬片取出后,一般用PBS洗2遍,然后再做固定。如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗,因为凋亡的细胞在洗的过程中有可能会脱落。在固定时可以选用冷丙酮、多聚甲醛、95%乙醇等固定液,以达到很好的固定效果。


6孔细胞培养板

以上是利用细胞培养板制备细胞爬片的具体过程,爬片的质量绝对了拍照的质量及实验数据的精准性,在操作时要严格按照流程进行。

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