细胞免疫荧光实验是标记免疫技术发展较早的一种,它可以观察组织或细胞内抗原物质的定位,以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。在这项实验中,细胞培养板是一种关键性的耗材。其实验步骤如下:
第一天:
1. 在细胞培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;
3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);
4. PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;
5. 吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜;
第二天:
6. 加荧光二抗:PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
7. 复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5min×4次洗去多余的DAPI;
8. 用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。
细胞免疫荧光实验
以上是细胞免疫荧光实验的具体步骤,用于这种实验的细胞培养板一般都要经过特殊的TC处理,以满足细胞的贴壁需求。此外还要注意,接种细胞时要轻柔混匀,防止细胞局部生长过密,影响实验进程。