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如何利用细胞培养瓶进行细胞传代操作
发表日期:2021-09-30

细胞传代是指需要将分割成小的部分,重新接种到另外的培养容器内,再进行培养的过程。细胞培养瓶是传代过程中的一种常用耗材,那么细胞传代的步骤具体是怎样的呢?

T25细胞培养瓶
T25细胞培养瓶

1、从培养箱取出细胞培养瓶,用酒精喷壶在瓶子表面喷洒75%酒精消毒并转移到超净台。

2、打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次,弃去PBS缓冲液。

3、可用移液器加入1-2ml胰酶,“十字”晃动,使胰酶充分接触细胞。

4、将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台,镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,准备终止消化,用75%的酒精喷洒瓶子表面,转移到超净台。

5、用移液器(或巴氏吸管)加入等量含血清培养基,终止消化。移液器充分吹打,使细胞能够完全脱落。

6、将瓶中混合液体转移至离心管中,配平,离心5分钟左右。

7、离心好后,用酒精喷壶喷洒离心管表面,转移进超净台,打开盖子,将上清液倒入废液缸。

8、加入适量体积含血清培养基,用移液器或巴氏吸管轻轻吹打,制成细胞悬液。

血清培养基瓶
血清培养基瓶

9、将细胞悬液分装进2个(或多个)洁净灭菌培养瓶,加入适量培养基,盖好盖子。

10、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台,观察细胞情况,细胞应保证一定数量,数量太少会影响生长情况。

11、在瓶子上做标记,注明传代时间、细胞种类、操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷瓶体表面,整理操作台,用75%酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。

T25细胞培养瓶
T25细胞培养瓶

以上是利用细胞培养瓶进行细胞传代的具体过程,注意在操作时应该穿好灭菌服,戴好灭菌手套和口罩,全程注意无菌操作,避免细胞受到污染。

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