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细胞培养板在流式细胞分析中的应用
发表日期:2021-09-13


流式细胞分析是一种先进的细胞定量分析技术之一,它在细胞水平上通过单抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的细胞培养板是其常用的一种细胞培养耗材。利用流式细胞测定细胞存活率步骤如下:

多孔细胞培养板

多孔细胞培养板

  1. 取对数生长期的细胞,以4×105/ml密度接种于6孔细胞培养板上;  
  2. 培养过夜后,用于相应实验处理;  
  3. 收集处理后的细胞培养液至流式专用管;  
  4. 加1mlPBS缓冲液清洗一次,清洗液加入管中;  
  5. 胰酶消化收集细胞于上述管中;  
  6. 1mlPBS缓冲液清洗剩余细胞一次,清洗液加入离心管;注:3-6步都收集于同一流式专用管。  
  7. 800g离心6min,去上清;  
  8. 加1mlPBS缓冲液重悬细胞,再次离心弃上清;  
  9. 重悬细胞于500 l含5 g/ml碘化丙啶(propidiumiodide,PI)的PBS缓冲液中;  
  10. 避光冰上孵育10min,用流式细胞仪测定细胞存活率;   
  11. PI可结合DNA,在一定波长的激发光作用下可发出荧光,其强度与DNA含量成正比,但其不能透过完整的细胞膜。而FS(前向散射)则是指示细胞大小的参数。因此,我们以FS为横坐标,PI的荧光值的对数(logPI)为纵坐标,就可将不同大小和不同荧光强度的细胞区分开:活细胞表现出较大的FS值和较弱的荧光强度;坏死的细胞碎片,由于丢失部分DNA,具有较小的FS值和较弱的荧光性;凋亡细胞的细胞膜具有通透性,细胞虽然聚缩变小,但核保持完整,所以显示出较小的FS值和较强的荧光强度。通过计算活细胞占所有细胞的百分率,即可得知细胞存活率。

流式细胞分析可以可以高速分析上万个,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、高、准确性好的优点。细胞培养板不止应用在流式细胞的分析中,在细胞克隆形成实验等细胞中初期实验条件摸索中发挥着重要作用。

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