细胞工厂多用于贴壁细胞的大规模培养,在细胞生长到一定程度之后就需要收获细胞了。由于贴壁细胞是贴附在容器的底部生长,因此在收获细胞的时候需要借助胰酶对细胞进行消化之后再收获。
胰酶属于异种蛋白酶,可以将细胞膜上和细胞培养瓶结合的蛋白质降解。通过在特定位置上降解蛋白,使蛋白间结合处蛋白降解,细胞由于自身内部细胞骨架张力作用下成为球形,从而使细胞分开。消化细胞的具体的步骤如下:
1、首先我们需要将细胞工厂内的培养液导出,这时候我们可以借助专用的管路系统,以减少细胞外源污染的风险;
2、导出培养液后,加入适量胰酶细胞消化液,略盖过细胞即可,根据胰酶效率差异可以增加或减少胰酶用量。室温放置30秒至2分钟(不同的细胞消化时间有所不同),依次摇晃容器终止消化,前后左右各10次,静置观察细胞解离后效果。
3、收集细胞悬液至储液桶即可。
在利用胰酶消化细胞工厂中细胞的时候,我们需要注意控制好消化时间,防止因为消化过度而影响细胞的活性,影响后期的实验。
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