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冻存管复苏流程及注意事项
发表日期:2023-01-25

我们在细胞培养过程中经常会使用进行细胞冻存,以此来保存细胞和减少细胞活力,当我们重新使用冻存细胞的时候就需要进行复苏而在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。

冻存管复苏流程及注意事项_富道细胞

我们在复苏的大概流程为:佩戴好实验物品如眼镜、手套等,从低温液氮罐中取出需要复苏的冻存管。迅速放入38℃水浴中,并不时摇动,在1分钟内使其完全融化,然后在无菌下取出细胞。然后进行离心之后弃去上层液,在接种在细胞培养瓶或者其他耗材中。在进行观察,来调整。之后就可以正常培养细胞。

需要注意的是细胞复苏操作时,应注意融化冻存细胞速度要快,可不时摇动安瓿或冷冻管,使之尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高,生长及形态良好。然而,由于冻存的细胞还受其他因素的影响,有时也会有部分细胞死亡。此时,可将不贴壁、飘浮在培养液上(已死亡)的细胞轻轻倒掉,再补以适量的新培养液,也会获得较为满意的结果。

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