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使用细胞培养瓶进行贴壁细胞传代方法
发表日期:2023-01-20

细胞培养是一项非常重要的实验技术,细胞培养到一定程度的时候必须借助细胞耗材方能达到细胞生长所需的条件,富道细胞为大家分享一下如何使用细胞培养瓶进行贴壁细胞传代。

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增。

使用细胞培养瓶进行贴壁细胞传代方法

对于贴壁不太紧的细胞如293细胞,可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶,一般过程为 (以下操作均按无菌操作的要求进行):

将长成致密单层细胞的细胞培养瓶中原来的培养液弃去; 加入0.25%胰酶溶液,视细胞培养瓶的大小加入体积为0.5ml或更多,以使充分浸润; 一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察细胞培养瓶壁半透明的细胞层,当见到出现细针孔空隙时,弃去胰酶溶液,并加入适量的细胞培养液终止消化;视实验要求分入多个细胞培养瓶继续培养,一般为一传二到一传四的比例。

这里,胰酶消化的程度是一个关键:消化过度则对细胞的活性损伤较大,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从细胞培养瓶瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。 影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养 瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等 。

这就是富道细胞为大家分享的如何使用细胞培养瓶进行贴壁细胞传代,希望对大家有所帮助。

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