我们在使用冻存管进行冻存细胞时不能直接在不加任何条件下冻存细胞，因为不管是细胞还是环境中的水分都会形成冰晶从而影响细胞死亡，所以需要加入保护液，使冰点降低，在后续冻结的过程中能有效的保护细胞因为冰晶的产生而造成死亡。明白了使用冻存管冻存细胞的大概方法之后，接下来跟大家详细说明一下：

1、消化细胞，将细胞悬液收集至离心管中。

2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。

3、沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。

4、将悬液分至冻存管中，每管1ml。

5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。

6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。

7、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟）→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。

注意：操作时应小心，以免液氮冻伤。液氮定期检查，随时补充，绝对不能挥发干净，一般30立升的液氮能用1～1.5月。