细胞摇瓶是一种三角形的细胞培养容器,多用于培养各种悬浮细胞或储存、制备培养基。在细胞生长到一定程度后,我们需要对其进行传代操作,那么,具体该如何操作呢?
由于细胞已经在生长培养基中悬浮,所以无需酶的作用使其从培养容器表面脱离,方法简单。首先准备装有悬浮细胞的三角摇瓶;将完全生长培养基预热至37℃;37℃ 培养箱充有二氧化碳浓度为 5% 的湿化空气。悬浮细胞传代有两种方式:
一、直接传代法
1、待悬浮细胞长满至 80%~90%(细胞悬液变黄),即可传代;
2、用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3;
3、加入适量的新鲜培养基,继续培养。
二、离心传代法(在发现有细胞碎片的情况下)
1、将细胞悬液转移到离心管内;
2、150 g 离心 5 min,弃去上层清液;
3、使用新鲜的培养基重悬细胞;
4、吸管吸取适量细胞悬液,装入新的细胞摇瓶,再加入适量的新鲜培养基,继续培养。
以上是细胞摇瓶中悬浮细胞的传代操作,在操作的时候我们要严格执行无菌操作,避免引入外源污染,影响细胞生长。
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