细胞传代是细胞培养过程中的一步重要操作,它是指将细胞从原培养体系转移到新鲜的生长培养基中,使细胞进一步增殖。贴壁细胞可以通过镜下观察,判断传代时机,而在细胞摇瓶中培养的悬浮细胞无法通过显微镜观察细胞密度,那该如何判断传代时机呢?
细胞的生长会经过四个阶段:迟缓期、对数生长期、稳定期、衰退期,无论是贴壁细胞还是悬浮细胞,都是在进入对数生长期,未达到混合状态的时候进行传代,这个时期的细胞生长迅速,呈指数势增长。由于悬浮细胞无法通过镜下观察细胞摇瓶中的细胞密度,可以在细胞生长初期绘制生长曲线,以此来判断传代时机。
细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后,会经过短暂的迟缓期,随后度过长短不同的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入平顶期,然后退化衰亡。
确定传代时机后,细胞摇瓶中的悬浮细胞传代一般通过稀释方式进行,用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3,加入适量的新鲜培养基继续培养。
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