传代培养是指需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。在悬浮细胞传代中,细胞摇瓶是不可或缺的一种细胞培养耗材。
细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,这类细胞称为悬浮细胞,如淋巴细胞。悬浮细胞传代步骤如下:
1.先将装有细胞的细胞摇瓶从培养箱拿出,用酒精喷洒瓶身后将细胞摇瓶拿进超净台;
2. 打开瓶盖,用200 ul移液器取100~200 ul细胞放入1.5 mlEP管中,瓶盖过火,拧紧,将培养瓶放回摇床;
3.将200 ul细胞混匀,取10 ul细胞加入10 ul台盼蓝,显微镜下计数。根据细胞数决定下游实验;
4.细胞需计数两次求平均值;
5.悬浮细胞生长参数;
6.根据不同细胞的生长曲线在合适的时间和密度给细胞接种传代。
以上是细胞摇瓶在悬浮细胞传代中的应用,这种耗材不止应用于悬浮细胞的培养,在液体菌种制备中同样具备广泛的应用,如鸡腿菇、枯草芽孢杆菌、皱柄白马鞍菌等,是一种经济实惠的细胞培养工具。
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