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细胞工厂在HEK 293T转染的的应用
发表日期:2022-10-12

HEK 293T细胞是我们许多科研小伙伴的入门细胞,也常被称作“工具细胞”,实验中常使用它来进行,慢病毒包装生产及滴度测定,细胞转染,条件培养基制作,蛋白表达验证等试验。而我们细胞工厂适用于工业批量生产、实验室操作和大规模细胞培养的常规耗材之一。

首先先跟大家说一下细胞转染的目的和原理

粗略理解为使用阳离子聚合物+质粒构成的复合物转入细胞内,让你转入的质粒瞬时表达,产生一个短暂(约持续96h)的效应,用于短期实验。

阳离子聚合物能够和带负电的质粒形成复合物,复合物穿膜(或是膜融合或是内吞)被细胞“吃掉”,从而将你的目的质粒带入细胞内。大约在转染完成后的48h,可以对细胞的转染效率和蛋白表达进行检测。

细胞工厂在HEK 293T转染的的应用_富道细胞

检测时,转染效率=检测阳性细胞数/检测时总细胞数*100%,一般使用流式细胞术进行检测。

细胞工厂在HEK 293T转染条件和过程:

以PEI用作转染试剂的转染为例,配制浓度为1μg/μL的PEI(配制方法网上搜索一下很好查),准备你的待转质粒(假设浓度为也为1μg/μL=1000ng/μL)。

PEI转染时的原则为,质量比,PEI:质粒=3:1;转染时需要使用无血清无双抗的培养基将PEI和质粒分别做成稀释液(一般称为A液和B液),再混合在一起方便两者聚合。以10cmdish的转染为例,10cm dish一般转染10μg的质粒,那么我们需要30μg的PEI。

A液:10μL质粒→500μL无抗无血清DMEM,混匀

B液:30μLPEI→500μL无抗无血清DMEM,混匀

B液逐滴加入A液中,涡旋1min,或枪头吹打约80次,室温孵育15-20min,不需要再次混匀直接填加到铺好的10cm dish中。

转染后18h,将培养液更换成新鲜的DMEM完全培养基;转染24-96h后检测。

这就是细胞工厂在HEK 293T转染的的应用了。如果有什么问题欢迎各位前来咨询

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