我们在使用细胞培养瓶培养时由于RAW 264.7细胞可以作为很多基础医学领域和药理学领域的研究模型，所以每个人的研究方向不同，所以细胞培养方式也有差别，今天富道细胞来跟大家说一下我们对该细胞的一些小心得。

由于该细胞生长快，条件好时24h内能分裂两次至少。而且喜欢扎堆，所以2天就要传代，不是真的空间不够，而是细胞都挤在一起。所以，如果细胞培养瓶里细胞密度小，培养基2天还是很好，可是细胞却扎堆，需要进行传代了，就会造成培养基的浪费，所有我们可以保持瓶中的细胞密度在20~40%左右，分裂2~3次就传代，这时刚好培养基发黄。细胞太少就浪费培养基了。

这个细胞是巨噬细胞，就是M0，未分化的巨噬细胞，外观是圆形高折光，贴壁非常快，10min内能贴80%，也容易脱落，无胰酶拍打200下或者胰酶室温30s轻轻拍打都能下来60~80%，不过无胰酶吹打是吹不下来的。

如果培养条件不好，它会分化，变成多边形，从高折光的小圆亮点变成灰色的一小片，变得粘附非常紧，所以我觉得应该控制消化时间和拍打力度，不要过分追求把所有细胞都弄下来，这样一来影响状态好的未分化圆形细胞活力，另一方面会把状态不好的分化细胞弄下来，不如缩短胰酶时间到1min内，把分化过的高粘附细胞留在瓶里，正好起到对细胞分化状态的选择作用。

我们进行传代时首先无胰酶拍打，能弄下来约50%的细胞，然后加胰酶拍打30s，镜下观察，一般30s刚刚好，剩下未脱落的都是分化的形态不好的细胞，这种细胞继续培养，如果要回到圆形，可以用胰酶消化后传代。