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如何控制细胞培养瓶内胰酶的消化时间
发表日期:2022-01-19

细胞培养涉及到细胞接种、培养、收获等流程,细胞培养瓶内的细胞生长到一定程度就需要收获细胞了,这时候就需要借助胰酶对瓶壁上的细胞进行消化后再收获,但在使用胰酶的过程中一定要控制好消化时间。

T75细胞培养瓶

T75细胞培养瓶

胰酶属于异种蛋白酶,可以将细胞膜上和细胞培养瓶结合的蛋白质降解。通过在特定位置上降解蛋白,使蛋白间结合处蛋白降解,细胞由于自身内部细胞骨架张力作用下成为球形,从而使细胞分开。胰酶消化的程度是细胞培养中的一个关键步骤:消化过度细胞碎片增多,黑渣子增多,细胞会成片脱落,严重影响细胞活性,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。

血清培养基瓶

血清培养基瓶

在不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37时,胰酶溶液的作用能力比较强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。

T25细胞培养瓶

T25细胞培养瓶

此外,如果是新购买的细胞,可以先用低浓度的胰酶摸索一下消化时间,每隔一分钟观察细胞是否变圆,做好记录。总之,在收获细胞培养瓶内的细胞时一定要控制好胰酶消化时间,这样才能很好的保持细胞的活性。
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