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原代细胞培养的操作步骤
发表日期:2021-04-08

细胞培养是生物学和医学研究最常用的手段之一,分为原代培养和传代培养两大类。原代培养也叫初代培养,是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养,适于做细胞形态、功能和分化等研究。

三角细胞培养摇瓶

悬浮细胞培养摇瓶


细胞培养要遵循严格的步骤,任何一步的忽视都有可能导致细胞培养失败,原代细胞培养具体步骤如下:

细胞工厂
细胞工厂

1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。

3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30-60分钟。

4、剪切:用眼科剪把组织切成2-3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。

5、消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6、分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500-1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。

7、计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2-7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。

8、培养:置于37℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。

T225细胞培养瓶
T225细胞培养瓶

原代细胞培养是成功传代之前的培养,是建立各种细胞系(株)必经的阶段。假如原代培养能够维持几小时甚至更长,即可进行进一步筛选。

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