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细胞培养板在细胞划痕实验中的应用
发表日期:2021-09-17


细胞培养板是一种多孔结构的细胞培养耗材,一般由透明的聚苯乙烯原料制成,常见的有6孔、12孔、24孔、48孔、96孔等,主要用于实验室细胞培养。在细胞划痕实验中,就用到了这种耗材。

多孔细胞培养板
多孔细胞培养板

细胞划痕实验是实验室分析细胞迁移能力的常用方法,其原理是当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过比较图像以确定细胞迁移速率。其操作过程如下:

1.准备工作:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)

2.先用marker笔在细胞培养板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5-1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

96孔细胞培养板
96孔细胞培养板

3.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。

4.第二天用枪头比着直尺,尽量垂直于背后的横线划痕,枪头要垂直,不要倾斜。

细胞工厂
细胞工厂

5.用PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基

6.放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样,拍照。

在做细胞划痕实验时需要注意,在选择细胞培养板时尽量选用6孔板,它可以保证有相当距离的平直划痕,因为有5 条定位线与划痕相交,这样就有 10 个可固定监测点,不作重复,可以减小误差。

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