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如何用计数法测定细胞工厂中细胞的生长状况
发表日期:2021-08-12


在利用细胞工厂进行细胞培养时,经常会涉及到对细胞活力和增殖情况的测定,在诸多测定方法中,细胞计数法是常用的一种。

细胞培养耗材

细胞培养耗材

细胞计数法是利用血细胞计数板计量细胞悬液中细胞数量,从而推算细胞的增殖和铺板密度的方法,简单易操作,但是耗材时间较长,所需细胞量比较多。同时,由于是人工操作,这种计数方法存在一定的误差。对细胞工厂中的细胞计数,可以按照以下步骤操作:


10层细胞工厂

10层细胞工厂

1.准备适合该中细胞消化浓度的胰蛋白酶消化液,吸出培养基,加入消化液,在孵箱中消化适宜的时间,待细胞变圆后加入等量或大于消化液体积的培养基终止消化。离心后,用培养基制成细胞悬液;


2层细胞工厂

2. 将盖玻片放置在血细胞计数板中间处,用10ul小枪头或者毛细吸管吸取少量的细胞悬液,然后将细胞悬液缓慢注入盖玻片和计数板的接触边缘,虹吸作用会让细胞悬液缓慢进入小室,充满间隙;

3.用 100倍显微镜下观察情况,计算中央方格和四个角落的方格中的细胞数量。原则是计左不计右,计上不计下,也就是说,计算压在左边中线和上边中线的细胞,但是不计算右边中线和下边中线的细胞;

4. 使用后,用超纯水和75%乙醇清洗干净;

5. 细胞密度=平均细胞数*104*稀释倍数(个/ml);

6. 细胞总数=细胞密度*细胞悬液体积(个)。

测定细胞工厂中的细胞生长状况可以按照以上步骤操作,需要注意的是,如果显微镜下有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,如果细胞团过多,超过10%,则说明分散情况不好,需要重新制备细胞悬液进行测定。

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