人胚肾细胞293使用细胞工厂细胞传代注意事项，这主要源于293细胞贴壁能力相对较弱的本性，以及在细胞工厂这种大规模、多层化的培养系统中实现环境均一性和精细化操作的挑战。

 细胞工厂

精准消化：消化是传代成败的关键一步。推荐使用0.25%胰酶与0.02%EDTA的混合液。操作时，使消化液覆盖细胞层后，立即吸弃大部分消化液，利用瓶底残留的少量消化液进行消化（约30-60秒）。在显微镜下密切观察，一旦发现细胞间隙增大、形态变圆，立即加入含血清的完全培养基终止消化。轻柔吹打，形成单细胞悬液。

把握传代时机：293细胞喜欢“宽松”的环境。传代时机的判断至关重要，应在细胞汇合度达到80%-90%​ 时进行。如果让细胞长满（100%汇合甚至过度生长），会造成细胞拥挤和堆积，不仅会影响其状态（如用于病毒包装或转染，效率会大打折扣），还会导致后续消化吹打困难，细胞团块增多。

全程轻柔操作：由于293细胞贴壁能力相对较弱，尤其是在复苏后或高代次时，任何操作都需格外轻柔。PBS清洗和吹打细胞时，动作要轻缓，避免将液体直接冲打在细胞层上。吹打细胞时，也要避免产生过多气泡，以减少对细胞的剪切力损伤。

10层细胞工厂

重视代次与冻存：293细胞在连续传代（几十代以上）后，其形态和生长特性可能发生变化，表现为更容易聚集成团、贴壁不牢、不易吹打成单细胞。因此，在细胞购入初期，就应及时大量冻存低代次的种子细胞（例如，在细胞长满瓶底70%-80%时消化冻存）。一旦发现正在使用的细胞出现状态下滑，立即启用新的冻存株，保证实验结果的稳定性和可重复性。

细胞工厂系统

实用小技巧

培养基偏好：293细胞适应偏酸性的环境（pH值在6.9-7.1时生长良好），通常使用高糖DMEM培养基。

培养器皿选择：如果细胞贴壁始终不理想，可以尝试使用一次性塑料培养瓶，其表面处理可能更利于293细胞贴附。对于玻璃器皿或需要增强贴壁的情况，可以使用0.2%的明胶溶液进行包被。

培养基预热：换液或传代时，将新鲜的培养基预热至37℃​ 再使用，可以避免温度变化对细胞造成应激