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细胞工厂培养细胞时注意的因素
发表日期:2023-05-12

细胞工厂培养细胞时细胞生长状态受各种因素的影响,这些因素看似不起眼,若不注意就会导致细胞负伤惨重。那么,这些小细节究竟如何影响细胞生长,在培养细胞时我们又该如何避坑呢?今天的富道课堂,带大家学习影响细胞生长的因素。

细胞工厂内细胞之间的接触程度

正常细胞(二倍体)存在贴壁接触抑制,长满后细胞生长停止,而肿瘤细胞等非正常细胞,接触抑制作用较弱,可生长至较高的细胞密度,但某些细胞过度生长,其损伤难以逆转,所以培养细胞时不建议细胞密度太高。

划重点:一般细胞汇合度达到 70-80% 即可传代,切忌长得太满。

细胞工厂内细胞生长附着物

贴壁细胞在正常情况下都会贴壁,但一些细胞本身贴壁不牢或贴壁性差,这个时候包被附着物能够促进细胞的黏附,所以在培养一些特殊细胞时,需要对细胞工厂内进行包被后使用。常用的基质有多聚赖氨酸(D 型、L 型)、明胶、胶原蛋白、细胞外基质混合物,培养时可根据需要自行选择。划重点:细胞贴壁差时可使用基质包被细胞工厂内。

大多数细胞系在 pH7.4 左右时生长最好,而常规培养基的指示剂为酚红,所以多数情况下,我们所见的培养基都呈红色,但不同培养基的颜色会有差异,例如 DMEM 比 1640 颜色深一点。在培养细胞时,也可以根据培养基的颜色判断细胞状态,如随着细胞生长,培养基颜色会变浅变黄。

细胞工厂培养细胞时注意的因素_富道细胞

划重点:培养细胞时关注培养基颜色变化,发现异常及时处理。

细胞工厂内培养温度

对于大部分人源细胞和温血动物细胞系来讲,比较适宜的培养温度是 37℃,因为这个温度接近体温,但为了安全可以再稍低一些,细胞工厂内高于体温的温度要比低于体温的温度更易产生问题。对于禽类细胞,由于其体温较高,所以培养温度可以设置为 38.5℃左右。

划重点:培养细胞时保持温度稳定,不要长时间敞开培养箱的门,并且不要将培养器皿大量重叠堆放在培养箱中,避免空气不循环。

细胞工厂内气相组分

大部分培养基适合于 95% 空气 5%CO2,但有部分培养基例外,如 L15 培养基适合于 100% 空气,CO2 会导致培养液 PH 降低(培养液变黄),严重影响细胞生长;若需要用 L15 培养基培养细胞,但没有 100% 空气培养箱时,可以拧紧瓶盖或换培养基(效果可能更好)培养。适用于 CO2 环境的培养基需保持培养瓶透气。

划重点:培养细胞时注意参照说明书选择培养基,并注意培养坏境。

当然,影响细胞生长的因素还有很多,如细胞培养耗材选择是否得当、质量是否过关等。富道细胞专注高端生物耗材的研发、生产与销售,所有产品均按照 c-GMP 标准生产,遵循 ISO9001、ISO13485 质量管理体系要求,从原料、生产成型、表面处理、密封检测、内包装、外包装、灭菌等方面层层把控,确保最终质量。

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