细胞摇瓶多用于悬浮细胞的培养，常见规格包括125ml/250ml/500ml/1000ml等。在培养细胞时我们会可能会遇到细胞成簇的情况，这是什么原因导致的呢？

1、细胞摇瓶培养液中含钙、镁离子。因为钙离子和镁离子会影响胰酶的消化能力，导致胰酶消化能力下降，培养细胞时，消化的细胞数量有限，加上细胞的密度依赖性，所以细胞培养时最好使用不含有钙镁离子的PBS缓冲液。这个时候我们可以用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。

2、支原体污染，这是细胞培养过程中常见的一种污染，由于支原体直径很小，仅在180nm~350nm之间，只有通过电镜才能看到。因此，支原体污染不易被实验者肉眼发觉。而支原体污染是个循序的过程，普通抗生素对其无效。因此，被支原体污染的细胞会持续受到影响，导致实验数据不准确。如发现支原体污染，丢弃培养物。

此外，如果细胞摇瓶内细胞成簇还有可能是蛋白酶过度消化使得细胞裂解引起的DNA污染，这个时候我们可以用DNase I处理细胞。总之，细胞成簇的原因是多方面的，我们需要分析具体情况，找出原因采取相应的解决办法。