离心管作为一种使用量非常大的一次性耗材,在微生物学、组织培养、分子生物学、遗传学、药物研发等领域均有广泛的应用。在免疫共沉淀实验中,它也是一种必需品。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。离心管在免疫共沉淀实验中主要用于细胞裂解缓冲液的离心,以得到实验所需物质。
当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在agarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高,常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
在离心的时候注意控制好离心速度,免疫沉淀反应后,在4°C 以3,000 rpm 速度离心3 min,将琼脂糖珠离心至离心管的底部;将上清小心吸去,琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3-4次;加入15μl的2×SDS 上样缓冲液,沸水煮5分钟。再对得到的物质进行质谱分析即可。
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